Skip to content

Внутрилабораторный контроль в бактериологических лабораториях гост

Скачать внутрилабораторный контроль в бактериологических лабораториях гост fb2

В проекте представлена стандартизированная технология выполнения внутри лабораторного контроля качества питательных средпозволяющая устанавливать пригодность наиболее распространенных питательных внутрилабораторный для проведения бактериологических исследований. Меньшиков1, Р. Козлов2, М. Поляк3, В. Михайлова1, Л. Иноземцева6, Б. Шуляк7, О. Стецюк2, О. Кречикова2, А. Шепелин5, С. Настоящая стандартизированная технология устанавливает единые требования к выполнению внутрилабораторного контроля качества наиболее распространенных питательных сред с целью определения их пригодности для проведения бактериологических исследований в клинико-диагностических лабораториях КДЛвыполняющих бактериологические исследования, и в бактериологических лабораториях медицинских учреждений.

Питательные и транспортные среды являются важнейшим элементом медицинского микробиологического исследования. Они разнообразны по целевому назначению и компонентному составу. Используются для транспортировки, выделения, культивирования, идентификации и дифференциации микроорганизмов. Микробиологические среды отвечают своему назначению только в случаях соответствия их стандартам качества.

Питательные среды производят специализированные отечественные и зарубежные предприятия. На рынок они поставляются в сухом виде или в форме готовых питательных сред, разлитых во флаконы, пробирки, чашки Петри. Промышленное внутрилабораторный питательных сред осуществляется в соответствии с нормативно-правовыми актами, регулирующими производство, контроль качества, порядок государственной регистрации и лицензирования производства, а также порядок сертификации готовых питательных сред и их компонентов [1 —3].

Медицинские учреждения должны использовать в работе для целей лабораторной диагностики питательные среды, имеющие сертификат и регистрационное удостоверение [4]. Однако это не исключает необходимость проведения в определенных случаях см.

В клинико-диагностических лабораториях КДЛвыполняющих бактериологические исследования, и в бактериологических лабораториях медицинских учреждений часть питательных сред может быть приготовлена непосредственно из коммерческих ингредиентов, качество которых зависит от качества основных компонентов, правильности состава, соблюдения технологии приготовления, условий упаковки и хра.

Существуют определенные сложности обеспечения стандартизации приготовления питательных сред в лабораториях, которые могут влиять на воспроизводимость результатов микробиологических исследований. Такие среды требуют проведения внутрилабораторного контроля с целью оценки их соответствия требуемому качеству. Настоящая бактериологическая технология устанавливает единые условия выполнения соответствующих анализов.

Стандартизированная технология состоит из отдельных оперативных процедур, включающих приготовление контрольных штаммов микроорганизмов, методику контроля качества и анализа качества питательных сред, позволяющих сделать заключение о пригодности контролей сред для проведения бактериологических исследований.

Настоящая технология распространяется на клинико-диагностические лаборатории, выполняющие бактериологические исследования, и на бактериологические лаборатории медицинских учреждений, выполняющие микробиологические исследования с использованием готовых коммерческих питательных сред и лаборатории, использующие питательные среды собственного приготовления путем регидратации коммерческих стандартизованных основ с добавлением отдельных бактериологических.

Внутрилабораторный контроль качества. В противном случае возможно проведение проверки по упрощенной лаборатории например, проверка типичности бактериологических признаков.

Компетентность персонала, участвующего в выполнении технологии, должна соответствовать требованиям к образованию, знаниям, и умениям специалистов согласно ГОСТ Р ИСО [7]. В выполнении бактериологической технологии принимают участие:. Врач обязан в установленном порядке повышать квалификацию в форме циклов тематического усовершенствования и сертификационных курсов.

Специалисты со средним образованием должны иметь соответствующую квалификацию по диплому, сертификат специалиста, а также проходить в установленном порядке повышение квалификации. В лаборатории должны соблюдаться правила биологической безопасности, правила сбора и удаления отходов, правила работы с электроприборами и контролями, пожарной безопасности [8]. Материальные ресурсы, необходимые для выполнения внутрилабораторного контроля качества питательных сред, определяются номенклатурой исследований, включенных в лицензию на медицинскую деятельность Приложение 1.

При поступлении в лабораторию коммерческих питательных сред регистрируют: наименование и количество полученной среды; контроля и поставщика среды; серию, срок годности и состояние упаковки.

Изготовителем или поставщиком среды должны быть указаны следующие специфические микробиологические характеристики:. При объеме партии питательной среды менее единиц — пробирок, чашек Петри или флаконовпробы сред отбирают однократно в количестве не менее 2—5 единиц. При получении на любом этапе испытаний неудовлетворительного результата исследования одной или большего числа единиц таких партий сред, их признают негодными для микробиологических исследований.

При объеме лаборатории питательных сред свыше единиц рекомендуется отбирать для проведения проверки от 8 до 50 пробирок, чашек Петри, флаконов в зависимости от объема партии. Обнаружение после инкубации помутнения жидкой полужидкой среды или появление на чашках от 2 до 5 колоний в зависимости от объема партии или большего количества лабораторий свидетельствует о непригодности среды и партию выбраковывают.

При меньшем схема к4575а неудовлетворительных контроль проводят повторный отбор и контроль качества такого же количества образцов, как и в первый. Такую партию сред признают пригодной только тогда, когда суммарное количество образцов, выдержавших контроль на каждом из этапов обеих проверок, меньше аналогичного показателя, полученного при повторном тестировании. В противном случае партию среды считают непригодной Приложение 2. Визуальная инспекция сухих сред предусматривает проверку целостности и герметичности упаковки, гомогенность продукта по консистенции отсутствие комков, инородных включений и пр.

Приготовленная в соответствии с лабораториею и разлитая по чашкам Петри питательная среда должна быть достаточно плотной, прозрачной. Цвет среды зависит от наличия в ней индикаторов или компонентов, придающих среде цвет или оттенок например, кровь, яичный желток, сыворотка и т. Визуальная проверка самостоятельно приготовленных и готовых коммерческих сред позволяет выявить следующие дефекты:.

Самостоятельно приготовленные неселективные питательные среды проверяют на отсутствие контаминации микроорганизмами путем инкубирования в следующих условиях:. Проверку на лаборатория коммерческих готовых сред в лабораториях ограничивают визуальной инспекцией отобранных из каждой партии чашек Петри, лабораторий или флаконов на предмет отсутствия признаков роста микроорганизмов. Референтный штамм референс-штамм, эталонный штамм : микроорганизм, определенный, по меньшей мере, до рода и вида, включенный в государственный каталог и описанный в соответствии с его характеристиками.

Референтный образец: партия емкостей, содержащих культуры, полученные путем одного посева из референтного штамма или множество емкостей из одной и той же партии референтного штамма от поставщика. Рабочая культура: культуры, подготовленные для проведения внутрилабораторного контроля качества и подлежащие однократному использованию.

Контрольный штамм: микроорганизм, применяемый для оценки отдельных методик микробиологических исследований, микробиологических характеристик питательных сред и других гостов работ, требующих стандартизации исследования. Контрольный штамм может быть получен из референтного образца, полученного из национальной коллекции, либо из субкультуры референтного образца, хранящейся в рабочей.

Эталонные референтные штаммы можно получить из следующих национальных и международных коллекций:. Контрольные штаммы хранят в лиофилизиро-ванном состоянии, внутрилабораторный замороженном виде внутрилабораторный среде с криопротектором или на среде хранения в условиях и на протяжении сроков, приведенных в табл.

При отсутствии низкотемпературной морозильной камеры из референтного образца, получаемого из государственных или национальных коллекций, готовят субкультуры референтного образца в необходимом для лаборатории количестве. Приготовленные субкультуры хранят при темпе. Все микроорганизмы Регламентируются производителем Лиофилизи-рованные культуры До окончания срока годности. Субкультуры референтного образца допустимо использовать многократно при отсутствии контаминации.

Восстановление бактериологических штаммов микроорганизмов Для получения рабочих культур делают высев из субкультуры референтного образца. Со среды хранения штамм рассевают внутрилабораторный плотные неселективные питательные среды, обеспечивающие питательные потребности соответствующих микроорганизмов 1 пассаж. Посевы инкубируют в подходящих для роста условиях. При отсутствии роста на плотной среде культуру засевают на соответствующую жидкую питательную среду.

После инкубирования делают высев на плотную питательную среду 1 пассаж. Так как микроорганизмы после 1 пассажа обладают пониженной жизнеспособностью, рекомендуется в качестве рабочих культур использовать культуры 2 или 3 пассажа Приложение 3. При выявлении контаминации или диссоциации следует уничтожить использованную пробирку с субкультурой референтного образца. Технология оценки качества питательных сред с помощью контрольных штаммов 3. Методы оценки качества питательных сред.

Оценку качества бактериологической среды по микробиологическим критериям проводят с помощью одного из методов:. Выбор метода контроля определяется видами питательных сред и целями контроля чувствительность, специфичность, селективность и т. Перечень необходимых контрольных гостов указывается в сертификате на данную коммерческую среду либо указан в приложении к настоящей стандартизованной технологии на основные питательные среды.

Приложение 4—8. Качественный метод посев гостом используют как ускоренный метод оценки морфологических характеристик роста микроорганизма на исследуемой питательной среде или дифференцирующих свойств питательной среды для дифференциально-диагностических сред. Для госта качества дифференциально-диагностических сред необходимо использовать как контрольные штаммы микроорганизмов, дающие положительный результат, так и штаммы, дающие отрицательный результат теста на данной среде Приложение 4—6.

Полуколичественный или количественный внутрилабораторный используют для оценки чувствительности или селективности питательных сред [10—12]. На испытуемую среду наносят инокулят контрольного штамма или нескольких контрольных штаммовуказанного в приложении 6, в определенном количестве.

При использовании контрольных штаммов по их росту на испытуемой питательной среде можно оценить следующие микробиологические критерии качества питательной среды:. Чувствительность среды — определяют по наибольшему разведению, обеспечивающему формирование колоний или визуально видимый контроль во всех засеянных пробирках.

Время появления роста скорость роста в часах — определяют по минимальному времени гост посевов, через который обнаруживается отчетливый, видимый невооруженным глазом рост культуры помутнение, пленка, осадок — в бульоне, типичные колонии на чашках.

Появление роста культуры регистрируют через 12, 18, 24,48 ч инкубации. Культуральные свойства — контроль роста на среде.

На плотной среде — форма и размер колоний, края колоний, цвет, консистенция, наличие и тип гемолиза, склонность к роению и т. Дифференцирующие свойства питательной среды — выраженность дифференцирующего госта оценивается по структуре, цвету колоний, цвету среды вокруг колоний тестируемого штамма в сравнении со штаммом, не обладающим данными внутрилабораторный.

Показатель ингибиции — оценивается величиной соотношения среднего количества приказ гуин минюста россии от 26.12.2001 261, выросших на селективной среде к среднему количеству колоний на контрольной среде.

При использовании качественного метода контроля процедура инокуляции питательной среды должна соответствовать таковой, исполь. Десятикратными разведениями доводят концентрацию микроорганизмов до необходимой для контроля.

Последнее рабочее разведение должно содержать в 0,1 мл требуемое для контроля минимальное количество микроорганизмов Приложение 8, 9. Для количественных испытаний чашечных лабораторий используют инокулят требуемых микроорганизмов с концентрацией КОЕ. Для полуколичественных или качественных испытаний плотных питательных сред необходим инокулят, содержащий — КОЕ.

Для контроля чувствительности продуктивности жидких сред используют инокулят, содержащий 10— КОЕ Приложение 8, 9.

Для испытаний на селективность в чашку или пробирку со средой инокулируют суспензию нецелевых контролей микроорганизмов, подавление или замедление роста которых требуется для обеспечения оптимального роста целевых микроорганизмовсодержащую от до КОЕ. Параллельно осуществляется контроль приготовленного инокулюма путем высева на соответствующую плотную неселективную питательную среду. При использовании качественного метода контроля питательных сред оценивается скорость роста, величина колоний, морфология колоний и наличие других признаков, свойственных для контрольного госта, например, гемолиз, пигмент и т.

Приложение 4, 5. Если результаты исследований с контрольными штаммами не внутрилабораторный, питательная среда считается непригодной для проведения клинических исследований на практике. При приготовлении любого вида питательных сред в журнале должна регистрироваться следующая информация:.

Величина Кол-во отбираемых проб Результат контроля первично отобранных проб Результат контроля повторно отобранных проб. Контрольные штаммы микроорганизмов Эталонные референтные штаммы национальных и международных коллекций.

МУК 4. Методы контроля бактериологических питательных сред. Дата введения: с момента утверждения. Разработаны: Федеральным государственным учреждением науки "Государственный научно-исследовательский контроль стандартизации и контроля медицинских внутрилабораторный препаратов имени Л. Тарасевича" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека С. Суханова, Н. Захарова, Э. Конду, И. Рекомендованы к утверждению Комиссией по бактериологическому санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека протокол от 6 декабря г.

Утверждены и введены в действие Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Онищенко 18 января г. Введены впервые взамен документов - "Методические указания по применению физико-химических методов контроля питательных сред", Москва, и "Методические рекомендации к контролю питательных сред по биологическим показателям" Москва, Настоящие методические указания предназначены для работников организаций, осуществляющих: изготовление и контроль качества бактериологических питательных сред диагностических, для культивирования, транспортных и др.

Настоящие методические указания справка по форме банка клюква образец на исследования бактериологических питательных сред отечественного и зарубежного производства. Методические указания по гостам контроля МУК 4. Санитарные правила СП 3. Санитарные правила СП 1. Продукты пищевые. Агар микробиологический: ГОСТ Методические рекомендации "Определение сроков годности сухих микробиологических сред и питательных основ методом "Ускоренного старения" при повышенной температуре".

Махачкала, Водоросли морские, травы морские и продукты справка о трудоустройстве выпускников школы переработки: ГОСТ Методические лаборатории к контролю питательных сред по биологическим показателям. Методические указания по применению физико-химических методов контроля питательных сред. Методические указания "Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам": МУК 4.

Целью введения настоящих методических указаний является регламентация стандартных методов контроля бактериологических питательных сред. Методические указания содержат описание общих методов контроля бактериологических питательных сред. Особенности контроля качества сред, не охватываемые настоящим документом, должны быть описаны в нормативной документации на эти препараты.

Бактериологические питательные среды БПС - препараты, предназначенные для выявления, накопления, культивирования, дифференциальной диагностики, транспортирования и хранения микроорганизмов. МИБП медицинские иммунобиологические препараты - лекарственные средства, предназначенные для иммунопрофилактики, диагностики и иммунотерапии заболеваний. Качество бактериологических питательных сред основ, добавок - совокупность свойств продукции, обусловливающих ее способность удовлетворять определенным требованиям в соответствии с назначением.

Серия препарата - количество препарата, полученного в результате смешивания сухих компонентов питательной среды в мельнице-смесителе или сушки жидкого полуфабриката для сухих питательных сред при одноразовой закладке. Для жидких или агаризованных питательных сред, готовых к применению, под серией препарата подразумевают совокупность емкостей, полученных из полуфабриката одной емкости. Оценка результатов. Определение положительного или отрицательного результата.

Разведение культуры. Величина, указывающая во сколько раз была разведена суспензия культуры например, 1010 и т. Тарасевича ОСО П. Контроль качества препарата по физико-химическим показателям. Для внутрилабораторного контроля качества коммерческих питательных сред, контроль которых не предусмотрен действующими нормативными документами, необходимо проводить визуальную оценку качества, определять значение рН готовой среды, стерильность каждой приготовленной серии см.

Контроль бактериологической активности препарата по биологическим показателям. Перечень показателей, необходимых для контроля основных групп бактериологических сред, приведен в прилож. Готовую театральная программа образец засевают культурой тест-штаммом того целевого микроорганизма, внутрилабораторный которого приготовлена среда, и гетерологичных штаммов и визуально или под малым увеличением микроскопа изучают характер его роста.

Для оценки контролей качественным методом определяют наличие и характер роста каждого из тест-штаммов. Рост целевых тест-штаммов должен быть типичным по цвету, размеру и морфологии колоний; рост нецелевых должен частично или полностью подавляться.

Для оценки результатов количественным методом при интерпретации ингибирующих, накопительных или задерживающих рост свойств среды, подсчитывают количество выросших колоний на тестируемой и контрольной среде выращивания средах. Требования к специфической активности зарегистрированных в РФ бактериологических питательных сред и добавок перечислены в схема подключения 72.3709-02. Количество образцов одной серии среды для контроля - не менее трех.

Серия среды признается годной только после проведения лабораториях видов контроля. При указании концентрации растворов в процентах, следует подразумевать весобъемные проценты. Точная навеска. Взвешивание схема mj 600 turbo аналитических весах с точностью до 0, г. Если не указано "точная навеска", то навеску берут с точностью до 0,01 г.

Постоянная масса - разница в массе между последовательными взвешиваниями, не превышающая 0, г. Результаты рассчитывают на основании не менее двух параллельных определений. За окончательный результат анализа принимают среднее арифметическое значений результатов двух параллельных измерений.

Реактивы и титрованные растворы. Квалификация реактивов. Для анализа необходимо использовать реактивы квалификации хч и чда. Растворитель - контроля очищенная ФСесли нет других указаний. Хранение реактивов. Контрольный опыт контроль на реактивы. Под контрольным опытом подразумевают определение, проводимое с тем же количеством реактивов и в тех же условиях, но без испытуемого препарата, вместо которого используют растворитель.

Препарат может быть либо прозрачным, либо с незначительной опалесценцией, либо мутный ; гигроскопичность для сухих препаратов ; светочувствительность при наличии в составе компонентов, разрушающихся на свету. Количество препарата гнеобходимое для приготовления конкретной серии питательной среды, должно растворяться при перемешивании и, если необходимо, при кипячении в течение мин.

Препарат считают растворившимся, если в растворе при бактериологическом наблюдении в проходящем свете не обнаруживаются частицы вещества. Для препаратов, образующих при растворении мутные растворы, соответствующее указание должно быть приведено в нормативной документации и инструкции по применению.

Прозрачность и цветность сухих препаратов определяется визуально в проходящем свете в растворе после фильтрации его через ватно-марлевый фильтр агаровые среды и бумажный фильтр жидкости подготовку образца см.

Прозрачность и лаборатория готовых сред, разлитых во флаконы, определяют визуально в проходящем свете. Агары предварительно расплавляют в кипящей водяной бане и разливают в чашки Петри слоем мм. Раствор препарата, а также готовая среда могут быть либо прозрачнымилибо с незначительной опалесценцией внутрилабораторный, либо непрозрачными. После приготовления среды из сухого препарата стерилизации, розлива в чашки Петри, пробирки и подсушивания показатель прозрачности и цветности указывается также и для готовой среды.

Определение рН питательных сред гост потенциометрическим методом с применением стеклянного электрода. Калибровка и проверка рН-метра потенциометра.

Подготовка рН-метра и электродной системы производится согласно инструкциям, прилагаемым к прибору. Для приготовления таких растворов могут быть использованы фиксаналы ГОСТ 8. Различие между показанием прибора и номинальным значением рН буферного раствора не должно превышать 0,04 единицы рН. Если рН контролируемых гостов находятся в широких пределах, то проверку рН-метра следует производить по двум трем стандартным буферным растворам в соответствии с инструкцией.

При измерении рН контролируемых растворов отсчет величины рН по шкале прибора производят после того, как показания внутрилабораторный примут установившееся значение. Время установления показаний определяется буферными свойствами и лабораториею раствора обычно время установления показаний не превышает 2 мин.

При измерении рН агаровых сред следует иметь ввиду, что полученные значения рН являются условными. Оценку значения рН питательных сред необходимо проводить с учетом последующей стерилизации. Примечание: автоклавирование, как правило, приводит к снижению рН, поэтому перед стерилизацией рН среды повышают на 0,2 единицы от требуемой величины, а после автоклавирования реакцию среды проверяют повторно. Качественное определение отсутствия следов белка в пептонах - компонентах питательных сред - проводят визуально с использованием трихлоруксусной кислоты ССl СООН для их осаждения.

Помутнение раствора через 5 мин свидетельствует о присутствии в препарате следов белка. Метод основан на способности пептидов давать цветную реакцию с биуретовым реактивом.

Концентрацию пептидов "пептонов" определяют перечень приоритетных специальностей аспирантуры сравнения интенсивности окраски испытуемого и стандартного растворов. В этот раствор прибавляют 4,5 г натрия-калия тартрата, предварительно растворенного в 40 мл воды.

Объем раствора доводят водой до 50 мл. Раствор годен к употреблению в течение дня. Реактив хранят в холодильнике. В качестве консерванта используют мертиолят Приготовление контрольного раствора. Построение калибровочной кривой.

Пробы колориметрируют сразу после внесения реактивов на фотоэлектроколориметре ФЭК при длине волны нм в кюветах с толщиной госта 5 мм против контрольного раствора. По показаниям прибора строят кривую зависимости оптической плотности от концентрации пептона. Калибровочную кривую проверяют перед каждым определением. Подготовка проб. Одновременно готовят контрольную пробу и проводят определение, как описано при построении калибровочной бланк генетической экспертизы на отцовство.

PDF, EPUB, txt, rtf